使用外來體的研究人員的挑戰包括手動設置密度梯度,因為它是乏味,耗時,并受用戶,實驗室和方法變異性的影響。還需要更大的尺寸和濃度分析的準確性。與此同時,該*域的**呼吁建立標準協議。1我們通過成本效益,大規模純化和快速分析外來體來為這些挑戰提供解決方案。具體來說,Biomek 4000工作站有助于克服人為變量,并為梯度設置提供一致,可重復,高通量的方法,代表了擴大問題的突破性解決方案。Optima超速離心系統幫助研究人員保持運行之間的可靠性,使結果高度可重現。
雖然科學家已經知道胞外囊幾十年,但**近才有技術能夠區分外來體與微泡和凋亡體。膜囊泡的分類 - 以及它們分離的**合適和有效的方案 - 仍然是研究的強烈*域。當隔離囊泡時,使用能夠分離囊泡的系統是**關重要的,以避免交叉污染。同時,需要增加尺寸和濃度準確度,以及增強工作流程。外來體是幾乎所有細胞類型釋放的膜囊泡(直徑約30-120nm)。2,3它們可以在血漿和其他體液中自由獲得,并含有蛋白質,mRNA和miRNA,代表它們分泌的細胞。如圖4所示,5 外來體作為診斷以及治療生物標志物已成為焦點。另外,外切體已經顯示為細胞間通訊功能的一部分,對抗腫瘤和促腫瘤活性都有影響。6先前的工作已經提供了深入了解使用密度梯度超速離心,外來體的隔離2,7雖然有是獲得純化后的大小和濃度的更具體的確認的一種努力。
Beckman Coulter提供涵蓋整個外來體工作流程的產品,使用自動化,離心和動態光散射(DLS)來純化和分析外來體樣品。Biomek 4000實驗室自動化工作站幫助克服了人的變數,并為密度梯度設置提供了一致,可重復,高通量的方法 - 擴大障礙的優雅解決方案。制備性超速離心有助于保持運行之間的可靠性和高重現性。重要的是,使用Optima MAX-XP和Optima XPN的制備性超速離心達到將生物大分子樣品及時分離到其密度梯度的等密度點所需的g力。DelsaMax CORE DLS平臺用于級分的尺寸分析,因為外來體顆粒可以是:(1)在溶液中分析,(2)具有統計學意義,(3)與電子顯微鏡相比具有更少的成本和時間。而不是花幾個小時來分析幾百個粒子,DelsaMax核心能夠在一分鐘內分析和確定數千個外來體。
步驟1-以對數期細胞密度-1×10 5細胞/ mL生長的Jurkat細胞
步驟2--臺式離心機(Allegra X-15R)以除去細胞和細胞碎片/
步驟3-高速離心機(Optima XPN)以除去較小的細胞碎片。
步驟4-高速離心機(Optima XPN)沉淀外來體。
步驟5 - Biomek 4000工作站設置密度梯度
步驟6-密度梯度超速離心(Optima XPN)以從共純化的蛋白質和其他酵母囊泡分離外來體。
步驟7-高速離心機(Optima MAX-XP)將溶劑從碘克沙醇和蔗糖交換為磷酸鹽緩沖鹽水
步驟8-DelsaMax CORE用于尺寸測定和分析
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