分析離心是一種分離方法,其中樣品中的顆粒根據其密度和所經歷的離心力進行分離。分析超速離心(AUC)是一種用于定量分析溶液中大分子的通用且可靠的方法。
分析離心原理
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分析離心是基于這樣的原理,即比其他顆粒更稠密的顆粒沉降得更快。同樣,較大的分子在離心力作用下比較小的分子運動更快。
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用于確定大分子的相對分子質量的分析超離心可以通過沉降速度方法或沉降平衡方法進行。
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大分子的水動力特性通過其沉降系數來描述。它們可以根據特定生物分子的濃度邊界在重力場中移動的速率來確定。
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沉降系數可用于表征隨著實驗條件的變化大分子的尺寸和形狀的變化。
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三種光學系統可用于分析型超速離心機(吸光度,干涉和熒光),可以實時精確,選擇性地觀察沉淀。
分析離心的步驟
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將少量樣品(20-120 mm 3)放入分析池中,放置在超速離心機內。
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然后操作超速離心機,使得離心力引起隨機分布的生物分子從旋轉中心徑向向外遷移穿過溶劑。
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分子距中心的距離是通過Schlieren光學系統確定的。
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從溶質濃度對距旋轉中心的徑向距離的平方繪制圖,據此確定分子質量。
分析離心的用途
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分析離心可用于測定大分子的純度。
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它也可以用于檢查超分子復合物分子量的變化。
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此外,它可以確定天然狀態下的溶質的相對分子質量。