差速離心是一種離心過程,其中通過施加一系列增加的離心力將組分分別沉降到離心管中。
差速離心原理
-
差異離心是基于不同大小和密度的生物顆粒沉降速率的差異。
-
當施加增加的離心力時,較大分子的初始沉淀發生。
-
取決于單獨離心步驟的速度和時間以及顆粒的密度和相對尺寸,其他顆粒沉降下來。
-
zui大種類的顆粒在離心管底部形成沉淀,在上清液中留下較小尺寸的結構。
-
因此,較大的分子以較低的離心力快速沉降,而較小的分子則需要較長的時間和較高的力。
-
如果顆粒的密度小于介質密度,則顆粒將漂浮而不是沉降。
差速離心的步驟
-
將樣品溶液在含有緩沖液的培養基中勻漿。
-
然后將樣品放入離心管中,該離心管在特定溫度下以特定離心力運行特定時間。
-
在該操作結束時,將在管的底部形成沉淀,將其與上清液分離。
-
將上清液添加到新的離心管中,在該離心管中以另一種速度離心特定的時間和溫度。
-
再次,將上清液與形成的沉淀分離。
-
繼續這些步驟,直到所有顆粒彼此分離。
-
然后可以通過測試特定顆粒**的指示劑來識別顆粒。
差速離心的用途
-
差速離心通常用于分離細胞中發現的細胞器和細胞膜。
-
它還可以用于核的低分辨率分離。
-
由于此技術可根據顆粒大小分離顆粒,因此可用于純化含有較大尺寸雜質的提取物。