速率-區(qū)域密度梯度離心是一種將顆粒根據(jù)其形狀作為大小進(jìn)行分離的離心方法,并按照相同的密度梯度離心原理進(jìn)行工作,但工作方式不同。也稱為移動(dòng)區(qū)離心。
速率-區(qū)域密度梯度離心原理
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速率區(qū)域離心法將顆粒按大小和形狀分級(jí)。
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該程序是在預(yù)先澆注的密度梯度上方的限制區(qū)域內(nèi)分層放置樣品。然后將密度梯度離心。
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所有顆粒都遷移到密度梯度中,因?yàn)槊芏忍荻鹊拿芏葍H比要離心的顆粒的密度低得多。
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顆粒主要通過(guò)尺寸和形狀分級(jí)。顆粒越大,沉淀越快。
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顆粒的球形對(duì)稱性越高,其沉降速度就越快。
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顆粒以其沉降系數(shù)的函數(shù)的速率通過(guò)梯度沉降。
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與差速離心不同,在樣品的整個(gè)區(qū)域中都分布有樣品,在速率區(qū)域離心中,樣品zui初僅以梯度形式出現(xiàn)在梯度的頂部。
速率-區(qū)域密度梯度離心的步驟
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在施加樣品之前,在離心管中制備密度梯度。
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然后將它們以帶的形式分層放置在漸變的頂部。
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在離心過(guò)程中,快速移動(dòng)的顆粒(較大的尺寸和圓形的形狀)先于較慢的顆粒移動(dòng),以便將不同的顆粒分離為梯度的不同部分上的不同譜帶。
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顆粒根據(jù)其沉降系數(shù)進(jìn)行分離,并從管的底部通過(guò)穿孔獲得顆粒。
速率-區(qū)域密度梯度離心的用途
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速率分區(qū)差速離心已用于分離病毒,因?yàn)樗鼈兙哂忻糠N病毒獨(dú)特的大小和密度不同的成分。
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該方法已經(jīng)用于在蔗糖梯度上分離RNA。
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此外,速率-區(qū)域差速離心也已用于從病毒和細(xì)菌中分離,純化和分離DNA分子。
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多核糖體和核糖體亞基的分離一直是該方法的zui早應(yīng)用之一。